摘要

背景/目的:甲钴胺鼻喷雾剂（NasoB12^®（印度三驾马车）最近被开发出来，以克服目前可用治疗途径的缺点。本研究旨在比较甲钴胺鼻喷雾剂与肌肉注射的药代动力学、安全性和耐受性。

研究对象/方法：这是一项随机、单剂量、开放标签、双向交叉比较生物利用度的研究，研究对象为18名健康志愿者。参与者被给予500微克甲基钴胺通过鼻腔喷雾剂(250 McG /0.05 ml，每个鼻孔一次注射)或100 McG /0.2 ml甲基钴胺通过肌内注射。每个研究阶段采集连续血样，给药后测定血中B12浓度。观察最大药物浓度(T_马克斯)、最高血药浓度(C_马克斯)和浓度-时间曲线下面积(AUC)比较。

结果:与肌肉注射相比，鼻腔喷雾剂对维生素B12的吸收数据显示平均值[T_马克斯]0.2对1.15小时的注射。在没有剂量标准化的情况下进行比较时，鼻腔喷雾剂显示出与肌肉注射相似的生物利用度（AUC比率为104.77%）_0-tAUC为101.85%_0-inf）.剂量正常化后，鼻腔喷雾剂的比较生物利用度与肌注量为~20%。高C_马克斯与肌肉注射相比，鼻内喷雾剂的剂量未归一化(197.49%);然而，剂量正常化后C_马克斯是39.50%。安全性评价表明，两种治疗方法均具有良好的耐受性。

结论：甲钴胺鼻腔喷雾剂经鼻后可充分吸收维生素B12，可作为当前选择的安全有效替代。

介绍

维生素B12 (B12)也被称为钴胺素，是体内主要反应的辅助因子，这些反应对DNA合成、红细胞形成和神经功能至关重要。B12缺乏可能是由饮食摄入不当、生物利用度问题或吸收不良等因素引起的[2,3]。

B12缺乏的传统治疗方法是口服配方，最好是反复肌肉注射钴胺素。肌肉注射疼痛、不方便，并常伴有不良反应(如形成脓肿、红斑和血肿)[4,5]。此外，注射药物的管理需要医疗专业人员，这增加了医疗系统的经济负担。这可能会影响患者的依从性，导致患者停止治疗[6,7]。每日口服补充维生素B12，依赖于内在因子(IF)，[8]因年龄增长、长期伴随二甲双胍或抗酸治疗、胃手术和恶性贫血患者而受阻[1,9,10]。

鼻腔给药途径因其容易获得、表面积大、血管化程度高、内皮基膜多孔、有可能绕过第一次代谢以及可能具有较高的全身生物利用度而备受关注与口头途径[11,12]。鼻内制剂克服了肌肉内制剂的缺点：它是无痛的，可自行给药，提高了依从性，消除了卫生专业人员给药的需要，防止了注射部位并发症，并降低了治疗的总体成本[13]。

已经研究过通过鼻路向不同人群输送B12[6,14,15]。氰钴胺鼻喷雾剂已获得监管批准。但根据氰钴胺鼻喷雾剂说明书中的药代动力学数据，该药物不用于治疗恶性贫血患者的B12缺乏，而是用于维持治疗，治疗一个月后，100微克肌注维生素B12治疗缓解，也用于其他[16]不足的补充。

氰钴胺必须经酶转化为两种代谢活性辅酶形式之一(即甲基钴胺和5-脱氧腺苷钴胺)，以发挥其在体内的作用。营养缺乏和酶的缺陷降低了身体合成活性形式[17]的能力。由于甲基钴胺的活性形式绕过了形成功能形式所需的几个酶反应，与氰钴胺[17]相比，它更好地保留在体内，所以在治疗维生素B12缺乏时，考虑甲基钴胺代替氰钴胺是谨慎的。

鉴于鼻内形式比其他现有配方提供的配方优势，一种新型鼻内甲基钴胺喷剂(500 mcg/0.1 mL)已经开发(Troikaa制药有限公司)。据我们所知，目前的I期研究是首个评估新型甲钴胺鼻喷雾剂与目前上市的甲钴胺肌注的安全性和药代动力学的人类研究。本研究是一项随机、单剂量、开放标签、健康受试者交叉研究。

方法

临床部分的研究是在Raptim研究有限公司进行的。该研究由Etiikka(独立伦理委员会)IEC批准，并按照ICH(国际协调会议)E6“良好临床实践指南”和世界医学协会《赫尔辛基宣言》的要求进行。

选题

18(18)名健康成年男性受试者，年龄在18至45岁之间，体重指数在18.5至24.9 kg/m^2.参与研究。所有受试者在参与研究前均提供书面知情同意，并可在研究期间随时退出。只有当基线实验室评估时，受试者的血清总B12水平在200 - 900 pg/ml范围内，并且通过血液学检查、生化检查、尿液分析和心电图与临床表现相关的其他实验室值正常时，才纳入研究。排除鼻息肉、流涕、鼻塞、变应性鼻炎、呼吸道感染和已知对甲基钴胺过敏的受试者。所有受试者均符合研究方案中规定的纳入和排除标准。

研究设计与药物管理

这是一项1:1随机、单剂量、开放标签、双向交叉比较生物利用度的研究。18名受试者的样本量被认为足以确定测试产品和参比产品之间的显著配方差异。两次处理之间保持15天的冲洗期。该研究于2014年1月8日至29日进行。受试者从给药前大约12小时开始被安置。根据随机化计划(由SAS生成^®美国软件(SAS研究所Inc .)(版本9.2),每个主题收到0.1毫升(500微克)测试喷鼻剂在每个鼻孔(0.05 250微克/毫升)或0.2毫升(100微克)参考IM注射methylcobalamin(卫材生产的卫材、日本)隔夜空腹至少10.00小时后在每一个时期。

安全

在研究期间对所有受试者进行了安全性和耐受性评估。这包括生命体征、健康状况、局部耐受性、心电图、生物化学、血液学和尿液分析。

用于B12分析的血液样本:在-10.00小时、-6.00小时、0.00小时采集血样（基线给药前样本）在给药后0.16,0.25,0.33,0.50,0.75,1.00,1.25,1.50,1.75,2.00,2.50,3.00,4.00,6.00,8.00,12.00,24.00,48.00,72.00,96.00和120.00小时，在预先标记的EDTA真空采样器中。血液样本在8°-10°C下以4000 rpm离心10分钟用于血浆分离。离心后分离血浆样本并进行traN分别放入预先标记的琥珀色eppendorf管中，分成两份。

血浆中维生素B12的估算：使用APL临床实验室和研究所私人有限公司的罗氏Cobas e411仪器，采用经验证的电化学发光法，对血浆样品进行维生素B12总浓度分析。使用罗氏诊断公司经验证的电化学发光免疫分析试剂盒（校准范围为30-2000 pg/ml）进行分析分析本研究对该试剂盒进行了进一步验证，以将其分析范围扩大至15000 pg/ml。对于所有药代动力学和统计评估，低于定量限（BLQ）的浓度被视为“零”。直到分析完成，分析员才有权使用随机化时间表。

药代动力学及统计学分析:主要药代动力学参数C_马克斯, AUC_0-t, AUC_0-inf次要PK参数t_½K_埃尔和T_马克斯采用WinNonlin®professional(版本5.3)非分区法计算。B12是一种内源性化合物，因此在基线校正和不校正的情况下进行了药动学分析。基线校正是通过从随后的剂量水平中减去平均剂量前水平来完成的。这对于评估来自膳食和内源性干扰的B-12的贡献是可取的。

本研究中的两种治疗在总剂量上有五倍的差异，并通过不同的途径给予。因此，也对药代动力学参数如C_马克斯, AUC_0-t和AUC_0-inf预测相同剂量下的相对生物利用度。

在基线校正后，使用SAS系统（美国SAS研究所，版本9.2）对剂量标准化和非标准化数据进行统计分析。对对数转换的药代动力学参数C进行两次单侧方差分析_马克斯, AUC_0-t和AUC_0-inf（α=0.05），以确定试验产品和参考产品之间的差异。未转换T_马克斯使用Wilcoxon符号秩检验。

结果

科目人口统计资料和性格

18名符合选择标准的[18]受试者参与了这项研究。总共有15名受试者完成了这两个阶段的研究。两名受试者在第二阶段没有向研究机构报告，因此退出了研究，一名受试者在第二阶段给药前因个人原因退出了研究。因此，我们考虑对15名完成研究的受试者的数据进行分析。表1给出了研究人群的基线人口学数据，图1描述了受试者的性格。

图1：研究流程图。

	年龄（年）	体重(公斤)	身高(厘米)	BMI (kg / m2)	性别	比赛
平均数±标准差	29.8±5.8	64.2±7.3	170.0 ± 5.1	22.2±2.0	男性	亚洲
中值的	29.0	63.0	170.0	22.7

表1:受试者基线的人口统计学特征(N=18)。

安全性和耐受性

这两种治疗（鼻喷雾剂和IM注射）都具有良好的耐受性。本研究期间未报告严重不良事件。

在研究的第一阶段，一名受试者服用鼻喷雾剂后出现了一个不良事件（眩晕）。发病后10分钟内于同一天解决。不良事件是轻微的，并且判断可能与服用的研究药物有关，对受试者进行监测，直到不良事件得到解决。

两名研究对象的研究后临床实验室值与研究前值相比直接显示胆红素水平升高;这些不良事件被认为是轻微的，并被认为可能与所给研究药物有关。

与研究前相比，一名受试者在研究后血清B12水平降低。该不良事件较轻，被判断为与服用的研究药物无关。对所有受试者进行了随访以进行安全性评估。随访结果在可接受范围内。

在研究后安全性评估中，所有参与研究的受试者的生命体征或心电图记录均无临床意义的发现。研究中未报告严重不良事件（SAE），包括任何鼻腔途径特异性SAE。因此，试验产品和参考产品在安全性方面具有可比性。

药物动力学

两种治疗的平均血浆B12浓度与时间曲线如图2所示。

图2：接受试验(鼻喷雾剂)和参考(IM注射)后总维生素B12的平均血药浓度时间曲线(无基线校正)。
插图:给药试验(鼻喷雾剂)和参考(IM注射)8小时后总维生素B12的平均血药浓度时间曲线(基线校正)。

试验（鼻内）和参考（肌肉内）产品的平均±SD基线血浆B12水平分别为396.14±98.66 pg/ml和368.01±55.83 pg/ml

鼻内甲钴胺喷雾剂导致较早的峰值浓度，平均T_马克斯而IM注射甲钴胺后1.15 h。

表2总结了基线校正和未基线校正以及剂量归一化和未剂量归一化两种治疗的药动学参数。

药代动力学参数	没有基线校正		与基线校正
	测试产品平均值±SD	参考产品平均值±SD	测试产品平均值±SD	参考产品平均值±SD
C马克斯(pg / ml)	19779.47±6726.28	10263.53±3818.40	19383.32±6766.21	9895.52±3816.05
CmaxDN(pg / ml)	39.56±13.45	102.64±38.18	38.77±13.53	98.96±38.16
AUC0-t(pg *人力资源/毫升)	123399.31 ± 31342.86	114320.43±20921.10	75533.03±29739.19	70905.39±18740.95
AUC0-tDN(pg *人力资源/毫升)	246.80 ± 62.69	1143.20±209.21	151.07±59.48	709.05±187.41
AUC0-inf (pg *人力资源/毫升)	243363.97±120348.80	262529.22 ± 77288.93	84243.44 ± 29729.80	86604.67±31352.09
AUC0-inf DN(pg *人力资源/毫升)	486.73±240.70	2625.29 ± 772.89	168.49 ± 59.46	866.05±313.52
T马克斯（人力资源）	0.20 ± 0.06 0.16#	1.15 ± 0.69 1.00#	0.20 ± 0.06 0.16#	1.15 ± 0.69 1.00#
t1／2（人力资源）	164.11 ± 162.6	209.13 ± 98.57	49.54±37.88	65.19±37.02
K埃尔(人力资源1)	0.0118±0.0111	0.0048 ± 0.0053	0.0235±0.0151	0.0206±0.0251

表2:比较500µg法(鼻用喷雾剂)和100µg参比法(IM注射液)的药动学参数。
AUC：血浆浓度-时间曲线下的面积；AUC_0-inf-血浆浓度以下的区域与从时间0到∞的时间曲线;C_马克斯-最大血浆浓度;T_马克斯，观察血浆t最大药物浓度的时间_1／2消除半衰期;K_e-消除速率常数；DN剂量标准化为甲钴胺1mcg剂量。^#中值的

表3总结了剂量标准化和非标准化数据的几何最小二乘平均值（%）、90%可信区间和受试者内变异性的比率。

药代动力学参数	几何最小二乘均值比率(%)	90%可信区间	Intrasubject简历(%)
无剂量标准化
C马克斯	197.49	160.48-243.05	32.24
AUC0-t	104.77	87.56 - -125.37	27.70
AUC0-inf	101.85	82.42 - -125.86	32.91
剂量标准化
C马克斯	39.50	32.09 - -48.61	32.24
AUC0-t	20.95	17.51 - -25.07	27.70
AUC0-inf	20.37	16.48 - -25.17	32.91

表3:统计分析总结(n=15)。The ratio of geometric least square means (%), 90 % CI and within subject variability for both dosenormalized and non-normalized data.

剂量归一化前，喷鼻剂和IM给药的B12总暴露量相似，AUC的检验/参考比分别为104.77%和101.85%_0-t和AUC_0-inf,分别。然而，喷雾剂给药后血浆中B12的平均最大浓度约为IM注射的2倍，以C_马克斯.

经剂量归一化后，鼻腔喷雾剂的生物利用度与IM注射液相比约为20%，其AUC的几何最小二乘法检验比分别为20.95%和20.37%_0-t和AUC_0-inf此外，与IM注射相比，鼻腔喷雾剂给药后血浆中B12的平均最大浓度约为~40%，如C_马克斯.

讨论

这是一项随机、单剂量、开放标签、交叉比较生物利用度研究，目的是确定新型甲钴胺鼻腔喷雾剂与甲钴胺IM注射的安全性和比较生物利用度。我们的研究首次在健康志愿者中通过鼻腔途径吸收甲基钴胺。

B12剂量在这个研究是500微克methylcobalamin鼻喷雾剂和100微克的IM注射,这是符合研究Nascobal®喷鼻剂500微克剂量用于鼻配方和100 mcg IM注射[16],这样的结果可以很容易地比较两个鼻配方。考虑基线校正数据，因为它能更准确地比较配方的性能。

本研究发现甲钴胺鼻喷雾剂的生物利用度与肌肉注射相当；然而，在剂量正常化后，发现其约为20%。据报道，商业口服B12片剂的生物利用度较低（~2%）[18]。由于目前甲钴胺的鼻腔制剂具有较高的生物利用度，与口服治疗相比，它可能导致B12缺乏症的更快、更可靠的治疗。此外，与肌肉注射相比，注射方便，不需要医疗专业人员进行管理。因此，新型甲钴胺鼻喷雾剂可作为口服和IM制剂的替代品，用于治疗维生素B12缺乏症。

现有文献表明，氰钴胺和羟钴胺鼻腔制剂(相对于肌肉注射)的相对生物利用度估计分别为2-6.1%[16,19]和2-5%[15]。因此，这种新型甲钴胺鼻腔喷雾剂的相对生物利用度比以往报道的要高。

T_马克斯在12±3.6 min(0.20±0.06 h)中，比氰钴胺喷雾剂[16](1.25±1.9 h)和羟钴胺喷雾剂[15](35±13 min)快。

并且，相应的参数C_马克斯，反映了我们研究中观察到的吸收程度为19383 pg/mL，而对于氰钴胺和羟钴胺鼻腔制剂，其吸收程度分别为758 pg/mL[16]和1716 pg/mL（源自750 mcg剂量下1900 pmol/L）[15]这表明甲钴胺的新型鼻腔制剂的吸收率高于其他B12鼻腔制剂的吸收率。

肌注氰钴胺100微克用于治疗B12缺乏。修正的基线C_马克斯在我们的研究中，100 mcg甲基钴胺IM注射后观察到的AUC值与文献[20]与氰钴胺100 mcg IM注射后观察到的AUC值相当。甲基钴胺鼻腔喷雾剂(500微克)的生物利用度与IM注射剂(100微克)的生物利用度相似，可以为维生素B12缺乏的治疗提供一种选择。此外，500mcg甲基钴胺鼻腔喷雾剂48小时后观察到的基线校正平均浓度为211.14±76.69 pg/mL(对应于B12水平从396.14±98.66上升到624.85±145.50 pg/mL)。这表明，隔天给药方案可能足以纠正低B12水平。5天后观察到的基线校正平均浓度为114.42±51.58 pg/mL(对应于B12水平从396.14±98.66上升到508.08±96.50 pg/mL)。这表明一周一次的剂量可以在纠正后维持足够的B12水平。这些剂量随后在103例维生素B12缺乏患者的临床试验中进行了评估(临床试验注册:CTRI/2015/06/005952)。

甲基钴胺的安全性已得到证实，500 mcg剂量的IM/IV注射已在世界许多地区得到批准。这在我们的生物利用度研究中也得到了支持，单剂量鼻腔喷雾剂和IM注射都被发现具有良好的耐受性。

结论

新型甲钴胺500 mcg/0.1 ml鼻腔喷雾剂是无痛的，自我给药，耐受性好，安全，鼻腔吸收快，生物利用度与100 mcg IM注射剂相似。因此，它可以为目前口服和注射治疗维生素B12缺乏症提供一个有吸引力的选择

宣言

资金

这项研究是由Troikaa制药有限公司资助的。

临床试验注册中心，CTRI编号：CTRI/2015/04/005687。

的利益冲突

作者声明没有利益冲突。资助方没有参与这项研究的设计;收集、分析或解释数据;在手稿的写作，或在决定发表结果。

伦理批准

同意参加

可获得的数据和材料:请联系通讯作者。

代码的可用性

不适用

同意出版和作者贡献

作者的贡献

概念化、方法论、研究指导、形式分析、所有数据的获取、数据的验证和解释:Dave H.所有作者都已阅读并同意该手稿的出版版本。

承认

三驾马车制药有限公司提供的试验产品和支持。

参考文献

1. 维生素B12缺乏:认识和管理。Fam内科医生96:384-389。［Ref。]
2. Pawlak R，Lester SE，Babatunde T（2014）通过血清维生素B12评估的素食者中钴胺素缺乏的患病率：文献回顾。欧洲临床营养学杂志68:541-548[Ref。]
3. Green R, Allen LH, Bjørke-Monsen AL, Brito A, Jean-Louis G, et AL .(2017)维生素B12缺乏。Nat Rev Dis primer 3: 17040。［Ref。]
4. Greenblatt DJ，Allen MD（1978）《肌肉注射部位并发症》，JAMA 240:542-544[Ref。]
5. Sartorius G，Fennell C，Spasevska S，Turner L，Conway AJ，et al.（2010）仓库油肌肉注射十一酸睾酮后影响疼痛时程的因素。亚洲期刊Androl 12:227-233[Ref。]
6. Estourgie-van Burk GF, van der Kuy PH, de Meij TG, Benninga MA, Kneepkens CMF(2019)儿童维生素B12缺乏的鼻内治疗。欧洲J儿科179:349-352。［Ref。]
7. Van WC, Austin P, Naylor CD(2001)维生素B12注射与口服补充剂。从注射改用药片可以节省多少钱？家庭医生可以吗47:79-86[Ref。]
8. Chan CQH, Low LL, Lee KH(2016)口服维生素B12替代治疗恶性贫血。Front Med(洛桑)3:38。［Ref。]
9. Kibirige D, Mwebaze R(2013)糖尿病患者维生素B12缺乏:常规筛查和补充是否合理?《糖尿病代谢紊乱》12:17。［Ref。]
10. Stover PJ（2010）维生素B12和老年人。当前临床营养代谢护理13:24-27[Ref。]
11. Türker S，Onur E，Ozer Y（2004）鼻路和药物递送系统。药学世界科学26:137-142[Ref。]
12. Ghori MU, Mahdi MH, Smith AM, Conway BR(2015)鼻腔给药系统:综述。Am J Pharmacol Sci 3: 110-119。［Ref。]
13. Chhajed S, Sangale S, Barhate SD(2011)优势鼻腔给药系统综述。国际药物科学文献2:1322。［Ref。]
14. Rozgony NR, Fang C, Kuczmarski MF, Bob H(2010)在住院的老年人中，维生素B(12)缺乏与长期使用质子泵抑制剂有关:氰钴胺鼻喷雾剂是否有益?J Nutr Elder 29: 87-99。［Ref。]
15. Van Asselt DZ, Merkus FW, Russel FG, Hoefnagels WH(1998)健康老年人羟钴胺的鼻腔吸收。Br J clinical Pharmacol 45: 83-86。［Ref。]
16. Nascobal鼻腔喷雾剂，氰钴胺，usp500微克/喷雾剂。［Ref。]
17. Kelly G（1997）《维生素B12的辅酶形式：了解其治疗潜力》，Alt Med Rev 2:459-471[Ref。]
18. Castelli MC，Wong DF，Friedman K，Riley MG（2011）与N-[8-（2-羟基苯甲酰）氨基]辛酸钠（SNAC）配制的口服氰钴胺的药代动力学：一项在健康男性受试者中进行的开放标签、随机、单剂量、平行组研究。临床33:934-945。[Ref。]
19. Tillemans MPH，Donders EMVJ，Verweij SL，Van der Hoeven RTM，Kalisvaart KJ（2014）给药途径对老年患者中钴胺素药代动力学的影响：一项随机对照试验。当前临床试验76:21-25[Ref。]
20. 美国食品和药物管理局(2003-2004)临床药理学和生物制药评论(S)。鼻喷雾剂(氰钴胺鼻喷雾剂)。［Ref。]

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条信息

文章类型:研究文章

引用：Dave H，Agarwal V，Maseeh A，Patel KR（2021）新型甲钴胺鼻喷雾剂与肌肉注射：一项随机、交叉比较生物利用度研究。Int J内分泌代谢杂志7（1）：dx.doi.org/10.16966/2380-548X.171

版权:©2021 Dave H等。这是一篇开放获取的文章，在知识共享署名许可协议的条款下发布，该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制，前提是注明原作者和来源。

出版历史：

收到日期:2020年12月15日

接受日期：2021年1月11日

发表日期:2021年1月19日