抽象的

本研究检测了当非亲缘白小鼠感染流感病毒时，对动物肺组织和血清中蛋白酶活性变化的影响。这些材料同时研究这种蛋白酶抑制剂的活性。

关键词

流感病毒;胰蛋白酶样蛋白酶;蛋白酶抑制剂

介绍

病毒和细胞的相互作用是一个单一的整体，表示一组的两个相对原则的内在关系。这种相互作用的净结果是通过所有者和始发遗传确定的两个，并取决于病毒繁殖和生物体的保护力的两个过程的调节。这些过程之间的平衡决定的相互作用的结果：拥有者，其绝对回收率或感染污染[1-6]的慢性形式的形成的破坏。

据了解，在流感病毒的复制，血凝素的前体合成，其分裂的大，小亚基是必要的由病毒感染性收购活动。分裂通过细胞胰蛋白酶样蛋白酶[7-11]中进行。在流感感染有特异性的细胞蛋白酶证明有细胞成分病毒蛋白的合作互动的改变。最有可能的，蛋白酶水平变化的动态绑定到该病毒的复制和蛋白水解激活由同一蛋白酶。然而，这种现象太少了研究;有的只是报道[12]关于早期阶段蛋白酶活性的下调及其在感染的后期在鸡胚为患流感，仙台[12]的病毒增加。

本工作的目的是研究实验性流感感染对感染流感病毒A的小鼠和鸡胚的蛋白酶动态和抑制活性的作用。

材料和方法

In researches, flu virus А/РR/8/34 (Н1N1), adapted for a pulmonary tissue of white mice (the virus was received from laboratory of museum strains of Institute of virology of D.I.Ivanovskiy of the Russian Academy of Medical Science) was used. The infectious titre of virus was 7 lg EID₅₀/0.2毫升。此外，我们使用的白交小鼠体重7-9和16-17g。动物通过А/РR/ 8/34在以0.05ml体积鼻内途径容易醚麻醉下出没稀释10^-2与20 ld相对应₅₀传染病病毒剂量。这种剂量在侵扰后6天内提供100％的动物破坏。屠宰动物（每组5只小鼠），将它们的肺和血液除去15,30分钟，1.6小时。并且在侵犯后1-6天内进一步。肺部在冷磷酸盐缓冲液中冲洗两次，并在砂浆中研磨，悬浮在缓冲液（每1μl1mL）中，通过TEH设备高强度超声波加工的模式7中的超声均化，芝加哥«COLE Parmel»（美国）以10000 rpm离心on Bizzer RC5C，由«Sorvall Instruments»，转子SS-34,1小时，+ 4°С制造。上清液和血液血清用于定义活动：传染性，蛋白酶和抑制蛋白酶。通过K.M.Vovchuk修饰的K.m.Veremeenko方法[13]测定胰蛋白酶样蛋白酶的活性[13]。鉴定肺血清匀浆中蛋白酶抑制剂活性的鉴定，血清血清中先前由A.P.Levitsky [15]描述的箱体方法。通过侵染9-10天的鸡胚来确定感染小鼠肺部的传染性滴度，并在LG EID中表达₅₀/0.2毫升。在标准方法下制备了血凝反应。

接收到的数据使用微软进行处理^®Excel软件。

结果和讨论

在未感染的动物的肺和血清中，胰蛋白酶样蛋白酶的水平和其抑制剂在观察期（6天）期间没有暴露于评估的变化，并且平衡（图1）。

图1:用6天流感病毒感染的白小鼠肺癌和血液血清中变化蛋白酶活性的动态（质量为6-9克和16-17大鼠的经验总数据提出了）

在А/ PR / 8/34（Н1N1）菌株的流感病毒鼻内侵袭小鼠中，揭示侵袭后从15分钟和高达6小时开始，肺和血清中的蛋白酶活性降低，和活性相反，诱导，特别是在肺部（图1）的抑制剂（图1）。未确定侵扰后的前6小时的血凝和传染性活动。

在随后的一段时间内，蛋白酶活性增加了3^{理查德·道金斯}一天达到了基准水平。在此期间，血凝和感染活性急剧增加。通过侵扰后48小时，传染病和血细胞凝集活性达到最大值（图2）。通过侵扰，感染性和血凝活性急剧下降后96小时和出没的动物的死亡率开始。出没的动物，谁由4仍然活着^th侵染后的一天，重复增加蛋白酶活性5-6^th一天变得可察觉，因此反复增加传染性和血凝活性。到6^th日，对照组流感病毒动物消灭。

图2:鸡胚尿囊液中流感病毒А/PR/8/34感染的小鼠肺匀浆的感染和血凝活性

因此，出没小鼠的肺部有感染病毒的积累和蛋白酶活性的抑郁症之间的相关性由2ⁿ天侵扰。同时，病毒滴度由5^th在受感染动物的肺组织和血清中，蛋白酶活性也在上升。

在搜索的蛋白酶活性抑郁症对1的原因^圣侵染后的一天，我们确定白癜风肺组织和血清中的抑制蛋白酶活性。

由图3可以看出，未受感染的动物血清中蛋白酶活性和蛋白酶抑制活性均处于稳定水平。在肺组织中，发现蛋白酶抑制活性非常少。

图3：流感病毒感染小鼠肺中胰蛋白酶样蛋白酶抑制剂的活性А/PR/8/34

在被侵染动物的肺组织和血清中，蛋白酶抑制活性在感染6 h后急剧上升，在感染2 h后下降ⁿ天，然后逐渐上升5^th的一天。

因此，我们有可能通过蛋白酶抑制活性的增强来解释感染后最初几个小时内蛋白酶活性的降低(在感染小鼠的肺组织中可以清楚地观察到)，并且蛋白酶活性升高了2-3^{理查德·道金斯}抑制活性抑制感染污染的日子。然而，同时增加蛋白酶和5的抑制活性^th侵染后的一天证据证据了这种时期蛋白酶活化的其他原因感染的发展。

引用的数据表明，在未受感染动物的血清中，蛋白酶活性和蛋白酶抑制活性的平衡在感染时被打破。在感染过程中有可能确定三个阶段，这三个阶段的特征是病毒繁殖程度、蛋白酶活性水平和蛋白酶抑制活性水平的不同。

最关键的变化在侵扰后的第一个小时内发生。侵染后6小时，蛋白酶的无论是在肺和在受侵染的动物的血清中的量下降，和蛋白酶抑制活性增加。因此，可以假设的蛋白水解活性的减小是与蛋白酶抑制剂的各个累积。显然，流感病毒侵染的细胞诱导肺组织的抑制剂二者的外观，并且在血清。

结论

在感染病毒（侵染后2天的最大积累期间，蛋白水解活性降低，然而，这种减少伴随着抑制剂活性的减少。可能，其中一种原因是使用细胞胰蛋白酶样蛋白酶在侵染小鼠的肺部肺部和侵染动物的生物体中的肺部中的蛋白水解病毒活化。蛋白酶活性的重复降低5-6天是由其他因素引起的，显然是细菌植物覆盖物。

参考

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文章信息

文章类型：研究文章

引文：Divocha Va（2016）小鼠生物病变的第一阶段抑制剂和蛋白酶的动态，实验性流感感染污染。AutoImmun Infec Dis 2（3）：DOI http://dx.doi.org/10.16966/2470-1025.118

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出版的历史:

收到的日期：2016年5月25日

接受日期：2016年6月20日

发布日期：2016年6月24日