摘要

背景:自身免疫性疾病在有限的国家鲜有报道。我们旨在调查布基纳法索自身免疫性疾病的负担、免疫学和临床诊断。

方法:我们在2012年至2014年间，在布基纳法索Bobo Dioulaso的SOURO SANOU大学医院前瞻性地登记了疑似自身免疫性疾病的患者，用于该队列研究。人口统计学特征、临床表现、血清自身抗体测定以及血浆病毒和细菌状态（HBV、HCV、HIV和登革热血清型1、2、3和4，结核分枝杆菌和莱姆病)。所有的血浆样品被储存在- 80°C时，没有立即进行分析。

结果:在三年的研究期间，总共有65名怀疑自身免疫性疾病的患者被诊断。在有限环境国家(布基纳法索)的患者中，有17/65名患者(26.2%)的转诊诊断是正确的。自身免疫性疾病发生率为17/73950(0.023%)。系统性红斑狼疮(SLE) 4/73950(0.005%)，类风湿性关节炎(RA) 5/73950(0.007%)， CREST和多发性肌炎2/73950 (0.003% %)，CREST 2/73950 (0.003%)， Gougerot Sjögren综合征(SSG) 1/73950(0.001%)，桥本甲状腺炎2/73950(0.003%)，结节病1/73950(0.001%)。诊断自身免疫性疾病的中位年龄分别为51岁(28 -75岁)，男女比为0.06(1/16)。血浆病毒状态(HBV、HCV、CMV、HIV、莱姆病、登革热1、2、3、4血清型)均为阴性。结核分枝杆菌(3.07%)。免疫抑制剂治疗自身免疫性疾病无效的患者占2/17。

结论:转诊诊断正确者17/65(26.2%)。在限制环境的国家(布基纳法索)，发病率为17/73950(0.023%)。自身免疫性疾病与感染之间无显著相关性;自身免疫性疾病与卫生假说之间也无显著相关性。

关键词

自身免疫;疾病;自身抗体

缩写

安娜:核抗体;中心体B蛋白;dsDNA:双链DNA;ELISA:酶联免疫吸附法;IFI:间接免疫荧光法;Jo-1: Histidyl-t-RNA合成酶;援助:自身免疫性疾病;RNP70 A、C:小核核糖核蛋白复合物;Scl-70: DNA拓扑异构酶I;SLE:系统性红斑狼疮; SmD: Smith’s antigen (a family of RNA-binding proteins); SSA/Ro: Sjögren’s Syndrome A antigen/small ribonucleoprotein particle (Ro 52 and 60 kDa); SSB/La: Sjögren’s Syndrome B antigen/Lupus antigen, La ribonucleoprotein domain family, member 3 ; U1RNP: U1 nuclear ribonucleoprotein (mixture of recombinant RNP70, A, C); RA: Rheumatoid Arthritis; HT: Hashimoto Thyroiditis

介绍

自身免疫性疾病是一个具有不同自然史和广泛临床症状的慢性致残性疾病的异质家族。这些疾病共同存在导致身体攻击自身器官和组织的免疫反应的潜在缺陷。大多数这些疾病不成比例地影响妇女；然而，人所有种族、族裔和社会经济群体的移民都受到影响[1,2].某些疾病，包括系统性红斑狼疮和硬皮病，在非裔美国人中更为常见，而其他疾病，如1型糖尿病和多发性硬化症，在白种人中更为常见。所有年龄段都受到影响，发病时间从儿童期到成年后期。虽然许多个体自身免疫性疾病很罕见，但总体而言，它们都是e被认为影响约5%至8%的美国人口——1400万至2200万人[3-8].由于自身免疫性疾病的慢性（以几十年为单位）及其使人衰弱的并发症，其医疗和社会经济成本非常高。此外，由于自身免疫性疾病影响妇女在其最富有成效的年龄，其对家庭和社会的影响可能是巨大的。尽管有关发病率的综合国家数据，自身免疫性疾病的患病率、医疗和经济影响总体上不存在，或者对于大多数个体自身免疫性疾病而言，可用的统计数据表明这些疾病的影响是显著的。下面重点介绍了一些特定疾病的可用数据。我们研究的目的是为建立免疫学和临床策略，以加强有限环境国家（布基纳法索）的自身免疫性疾病诊断，自身免疫性疾病的发病率、患病率、发病率和死亡率尚未发现。

材料和方法

道德的声明

我们研究中分析的样本来自于到医院就诊的患者。我们研究中登记的自身免疫性疾病患者单独或与其他药物联合接受有效的免疫抑制剂治疗。该研究得到布基纳法索瓦加杜古国家健康研究伦理委员会的批准。患者参与本研究的人员给予书面知情同意。

患者和方法

我们前瞻性地纳入2012年1月至2014年11月期间在布基纳法索Bobo Dioulasso大学医院SOURO SANOU和另一家私人诊所进行自身免疫性疾病医学和免疫学诊断的患者进行队列研究。人口学特征、临床表现、血清自身抗体谱和血浆病毒和细菌状况(HIV/HBV/HBC/CMV/登革热血清1、2、3和4型)结核分枝杆菌/莱姆病)。

在我们的研究中，自身免疫性疾病的诊断是结合自身抗体血液测试-射线、临床表现和血液测试(测量营养功能和炎症)。此外，采用一种诊断标准来确认每个病例的自身免疫性疾病没有IFI方法;患者血清自身抗体谱是临床诊断的重要前提。事实上，ANA阳性和抗双链天然DNA (antidsDNA)或抗sm抗体的存在构成了系统性红斑狼疮(SLE) 11个诊断标准中的2个[2,9-11];高滴度ANA阳性或存在抗ro /SSA或抗la /SSB抗体为Sjögren综合征[10]的诊断标准;抗Jo-1抗体的存在是皮肤多发性肌炎的诊断标准[12,13];抗着丝点或抗拓扑异构酶I(抗scl70)抗体的存在是皮肤系统性硬化分型为局限性或弥漫性[9]的标准。

实验室试验

多重免疫点分析:我们使用以下Immunot试剂盒诊断自身免疫性疾病（法国生物医学诊断）

• ENA-DOT 7套件定性酶免疫分析法(EIA)同时检测7种特异性抗体:针对可提取的核抗原(SS-A, SS-B, Sm, Sm/RNP和Scl70)，以及针对2种额外抗原(着丝粒和Jo-1)。
• ANCA-MBG-DOT工具包定性酶免疫分析法(EIA)同时检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)针对髓过氧化物酶(MPO)和丝氨酸蛋白酶(PR 3)。抗肾小球基底膜(GBM)抗体使用基于IV型纯化抗原。
• CYTO-DOT4试剂盒定性酶免疫分析法(EIA)，用于同时检测针对细胞质有机物的4种自身抗体(抗线粒体、抗jo1、抗核糖体和抗-LK1)
• DNA-DOT工具包定性酶免疫分析法(EIA)用于检测针对(DNA原生)的抗DNA抗体。
• 抗原被包被在检测条带上的不同膜上;
• 首先，化验条在含有病人稀释样品的反应管中孵育。如果该样本中含有至少一种抗体，这些抗体将识别并与相应的抗原结合。在孵育后，第一步清洗除去所有未结合的蛋白质。
• 碱性磷酸酶标记的蛋白A结合到捕获的抗体。多余的未结合共轭物通过第二步洗涤除去。
• 用磷酸酶的不溶性底物（BCIP/NBT）观察结合结合物。这将形成蓝色圆圈，确认受试样品中存在自身抗体。
• Anti-CCP采用两步免疫分析和自动样品预处理技术，使用嵌合发光微粒免疫分析(CMIA)技术和灵活的检测协议(chimiflex)半定量测定人血清中针对环瓜氨酸肽的Ig G类自身抗体。结果< 5 U/ml为阴性。Ig G和Ig M RF的测定采用嵌合发光微粒免疫分析(CMIA)技术，采用灵活的检测协议(chimiflex)。结果< 20 UI/ml的样品被定义为阴性。

HIV、HBV和HCV筛查：发光微粒子免疫分析技术（CMIA）ci4100^®)用于筛查HIV、HBV和HCV。

CMV和莱姆病筛查：酶联荧光分析(ELFA)技术(MiniVidas^®)用于巨细胞病毒和莱姆病的筛查。登革热血清型1、2、3、4、5和结核分枝杆菌采用免疫层析技术(Hexagon D^®和六边形结核病^®°)。

统计分析

使用Wilcoxon检验对数据进行分析以比较比率。我们使用Fischer（t）检验对百分比进行检验。当分布的正态性未得到验证时，使用非参数检验（Kruskal Wallis和Mann Witney）。当p<0.05时，结果被认为具有统计学意义。使用STATA进行分析™ .

结果

患者和基线特征

在研究期间的访问人数为73950，包括17例自身免疫性疾病。65例患者中有17例(26.2%)转诊诊断正确。发生率为17/73950(0.023%)。

表1显示了研究队列中自身免疫性疾病患者的人口学和临床特征。比较性别对自身免疫性疾病的影响，女性比男性更容易患自身免疫性疾病(p=0.004)。分析自身免疫性疾病与种族或民族和家庭年收入的相关性，没有观察到民族和家庭年收入的差异(p=0.7)。

表1:研究队列（n=65）患者的人口学和临床特征

抗HBV或HCV(乙型或丙型肝炎病毒)、HIV、CMV、伯氏疏螺旋体在SSG、SLE和PR等自身免疫性疾病患者的血清或唾液中发现。在我们的研究中未发现相关性（p=0.3）。

自身免疫性疾病患者血清中的炎症蛋白谱

表2显示了研究队列中自身免疫性疾病患者血清中的炎症蛋白谱。分析蛋白质的不同部分，发现低白蛋白血症与自身免疫疾病有关(p=0.02)。因此高γ球蛋白血症与SLE有关，低γ球蛋白血症与桥本甲状腺炎有关。

表2:自身免疫性疾病患者血清中的炎症蛋白谱
拿拿淋:不适用

自身免疫性疾病患者血清中的自身抗体谱

表3显示了研究队列中自身免疫性疾病患者血清中的自身抗体谱。通过比较自身免疫性疾病类型的比例，发现我们队列中没有显著的统计学差异（p=0.07）。

表3:自身免疫性疾病患者血清中的自身抗体谱

布基纳法索性别与自身免疫疾病之间的关系

在我们的研究中，女性在受影响的研究成员中占主导地位。总体而言，94.12%(16/17)为女性，5.88%(1/17)为男性。免疫点技术的敏感性和特异性分别为100%和57%。

诊断自身免疫性疾病的血清学检测的正确使用和解释对临床医生提出了挑战，原因有两个：第一，大多数实验室检测自身免疫性疾病的敏感性和特异性明显低于100%，第二，使用不同的技术检测自身抗体，如间接免疫法免疫荧光或多重免疫斑点分析给出不同的结果。

自身免疫性疾病比例与患者社会经济法规

表4显示了自身免疫性疾病和患者社会经济地位在我们研究中的比例。比较妊娠对自身免疫性疾病发生的影响，发现多胎妊娠的妇女比初产的受影响更大(p=0.002)。

表4:自身免疫性疾病的发病率和患者的社会经济法规

女性年龄与自身免疫性疾病

图1显示了妇女的年龄和自身免疫疾病。

图1：女性年龄与自身免疫性疾病

根据自身免疫性疾病的不同年龄比例比较，SLE和SSG在32.5岁和35岁的年轻女性中更常见(Khi 2=5.30)。老年女性患CREST(68岁)、RA(60.4岁)、HT(50岁)及CREST和多发性肌炎(46.5岁)的可能性较大(Khi 2 = 3.72)。

讨论

自身免疫性疾病发病率

在本研究中，自身免疫性疾病的发生率非常低(0.023%)，除1例患者外，所有患者均为女性。在有限环境国家(布基纳法索)的患者中，有17/65名患者(26.2%)的转诊诊断是正确的。数据分析证实自身免疫性疾病发病率低。系统性红斑狼疮(SLE)为0.005%，类风湿性关节炎(RA)为0.007%，CREST及多发性肌炎为0.003%，CREST为0.003%，Gougerot Sjögren综合征为0.001%，桥本甲状腺炎为0.003%，结节病为0.001%。自身免疫性疾病在美国和欧洲人群中的患病率在4-10%之间[8,14-18]。考虑到自身免疫性疾病在美国和欧洲的患病率为4-10%，参考文献中所发现的0.023%的自身免疫性疾病是非常低的，这可能简单地说明还有很多其他的自身免疫性疾病患者没有被诊断出来。我们报告SLE和SSG在年龄分别为32.5岁和35岁的年轻女性中更为常见。老年女性患CREST(68岁)、RA(60.4岁)、HT(50岁)及CREST和多发性肌炎(46.5岁)的可能性较大。在自身免疫性疾病中发现的这种性别不平等往往是由于激素因素[3-8,19,20];抗体的产生和淋巴细胞的出现在女性比男性高[2]。 Indeed, in the mouse model of MS, experimental autoimmune encephalomyelitis in mice, disease severity is increased by castration in male mice diffuse and decreased by testosterone implantation in females diffuse [4].

性腺激素的免疫调节作用，特别是睾酮，可能是自身免疫性疾病与女性特异性关联的基础。

我们还报道了与RA, SSG, HT, CREST/多发性肌炎和妊娠呈正相关。这些结果在许多研究中都有报道[12,13,21-24]。这表明，在怀孕期间从胎儿细胞通过胎盘的过渡，以及它们在分娩后在母亲体内的持续存在，在某些情况下会干扰免疫系统，这解释了经产妇女比那些只有一次怀孕的妇女更有可能患有自身免疫疾病。

在我们的研究中，我们发现卫生假说和自身免疫性疾病没有关联。在我们的研究中，年收入非常低(< 5760美元USA)。研究人类自身免疫性疾病风险与卫生程度的关系发现了许多关联[24]。

我们还检测了RA、SLE、CREST/多发性肌炎、HT和感染因子(HIV、HBV、HCV、莱姆病、登革热血清型1、2、3和4)的阴性相关性，结核分枝杆菌和RA病例的阳性相关性(3.07%)。

自身免疫性疾病及其相关疾病可能结核分枝杆菌考虑到结核分枝杆菌与自身免疫性疾病之间的某些观察到的相关性[1,2,9-13]，感染者可能会调节免疫反应和RA风险。评估与自身免疫性疾病相关的RA风险是有意义的结核分枝杆菌人群中的感染结核分枝杆菌频率足够高(例如，非洲热带);也许更重要的是，在任何按性别划分的人口中。

然而，我们的发现与直接识别患者样本中带有临床症状的自身抗体是一致的。在限制条件国家，自身抗体的鉴定对自身免疫性疾病的诊断至关重要。临床医生可以使用这些结果作为对患者进行分类和/或评估他们对特定疗法的反应的指导，特别是在靶向生物疗法发展的情况下[12,13,21]。

我们的技术为基于多重检测的自身抗体定量提供了一种新的方法，与早期的方法如细胞系印迹试验和传统的一井一检测微滴酶联免疫吸附试验相比具有优势[3,22,23]。这些多重检测使使用单一平台和单一血清样本同时检测多种生物标志物成为可能。在本研究中，我们对AID患者中最常见的自身抗体的检测显示了不同水平的临床敏感性。

骨密度测试^®允许以高特异性（99.8%）从单个血清样本中并行检测七种抗原。这种方法大大节省了时间，避免了目前大多数临床试验实验室用于AID样本检测的常规首次筛查和确认后算法。BMD只需要20μL样本，并遵循与传统ELISA分析相同的步骤。BMD具有低的安装成本和快速的样本处理时间，为当前可用的多路测试系统提供了一种价格合理的替代方案。这些节省成本的功能使预算有限的小型实验室能够使用该技术，而无需大量资本支出和实验室技术人员培训。与已建立的ELISA分析方法相比，BMD具有极好的分析敏感性（100%），但特异性较差（57%）[4,8,11]。此外，与线性免疫分析相比，BMD代表了患者临床管理的数量优势[25-28]。

结论

转诊诊断正确者17/65(26.2%)。在限制环境的国家(布基纳法索)，发病率为17/73950(0.023%)。自身免疫性疾病的发病率极低，可能是由于一些未确诊的患者。自身免疫性疾病与感染之间无显著相关性;自身免疫性疾病与卫生假说无显著相关性。

致谢

我们感谢布基纳法索大学医院Bobo Dioulasso博士(大学医院)的研究人员为患者提供自身免疫性疾病和临床数据。

作者的贡献

构思并设计了实验：Y Sourabié、Y Traoré、F Fumoux、M S Ouédraogo和C Sirima

进行实验：Y Sourabié、Y Traoré和M S Ouédraogo

分析数据：Y Sourabié和Y Traoré

提供试剂/材料/分析工具:Y Sourabié， Y Traoré和F Fumoux，

写了论文:Y Sourabié， Y Traoré， F Fumoux, M S Ouédraogo和C Sirima

利益冲突声明

我们声明我们没有利益冲突。

参考文献

1. Abreu AS，Fernandes GH，Borba EF，Guedes LKN，Ramos JF等。（2014）皮肌炎中的肌肉骨骼结核：关联还是巧合？开放性风湿性自身免疫疾病杂志4:58-61[裁判。］
2. 自身免疫性多腺疾病I型患者的肾上腺和类固醇细胞抗体与肾上腺皮质和卵巢功能衰竭的风险。临床内分泌代谢杂志64:494-500。［裁判。］
3. (2)酶联免疫吸附试验(ELISA)。3抗原包被管中酶联抗免疫球蛋白定量特异性抗体。J Immunol 109: 129-135。［裁判。］
4. Forsblad-d'Elia H，Carlsten H，Labrie F，Konttinen YT，Ohlsson C（2009）血清性类固醇水平低与原发性干燥综合征的疾病特征相关；补充脱氢表雄酮可恢复浓度。临床内分泌代谢杂志94:2044-2051[裁判。］
5. Habash Bseiso DE，Yale SH，Glurich I，Goldberg JW（2005）结缔组织疾病的血清学检测。临床医学研究3:190-193。[裁判。］
6. Haga HJ, Rygh T(1999)原发性Sjögren综合征患者高泌乳素血症的患病率。J Rheumatol 26: 1291-1295。［裁判。］
7. Hanly JG, Su L, Farewell V, Fritzler MJ(2010)系统性红斑狼疮自身抗体多重检测方法的比较。J Immunol Methods 358: 75-80。［裁判。］
8. Hanly JG, Thompson K, McCurdy G, Fougere L, Theriault C, et al.(2010)使用多重方法学测量系统性红斑狼疮患者的自身抗体。J Immunol Methods 352: 147-152。［裁判。］
9. Balboni I, Chan SM, Kattah M, Tenenbaum JD, Butte AJ, et al.(2006)多重蛋白阵列平台用于分析自身免疫性疾病。年度免疫Rev 24: 391-418。［裁判。］
10. 《临床检验医学的标准化：一种伦理反思》，安·瑞姆论文8:1061-1063[裁判。］
11. Bossuyt X, Frans J, Hendrickx A, Godefridis G, Westhovens R, et al.(2004)间接免疫荧光法检测抗ssa抗体。临床化学12:2361-2369。［裁判。］
12. (2008)对自身免疫和生殖的双向影响。嗡重录更新14:359-366。［裁判。］
13. Correa PA，Gomez LM，Cadena J，Anaya JM（2005）自身免疫和结核病。与TNF多态性的相反关联。风湿病杂志32:219-224[裁判。］
14. Forsblad-d'Elia H，Carlsten H，Labrie F，Konttinen YT，Ohlsson C（2009）血清性类固醇水平低与原发性干燥综合征的疾病特征相关；补充脱氢表雄酮可恢复浓度。临床内分泌代谢杂志94:2044-2051[裁判。］
15. Habash Bseiso DE，Yale SH，Glurich I，Goldberg JW（2005）结缔组织疾病的血清学检测。临床医学研究3:190-193。[裁判。］
16. Haga HJ, Rygh T(1999)原发性Sjögren综合征患者高泌乳素血症的患病率。J Rheumatol 26: 1291- 1295。［裁判。］
17. Hanly JG，Su L，Havey V，Fritzler MJ（2010）系统性红斑狼疮自身抗体检测的多重分析比较。免疫方法杂志358:75-80[裁判。］
18. Hanly JG, Thompson K, McCurdy G, Fougere L, Theriault C, et al.(2010)使用多重方法学测量系统性红斑狼疮患者的自身抗体。J Immunol Methods 352: 147-152。［裁判。］
19. El Miedany YM, Ahmed I, Moustafa H, El Baddani M (2004) Sjögren综合征中的高催乳素血症:一个患者子集还是一种疾病表现?关节骨脊柱71:203-208。［裁判。］
20. Endo Y，Negishi I，Ishikawa O（2002）微嵌合体对Sjögren综合征发病机制的可能贡献。风湿病学（牛津）41:490-495[裁判。］
21. 关键词:结缔组织疾病，抗核抗体，检测方法，诊断abstract:诊断病理4:1。［裁判。］
22. 金布尔S，崔L，洛佩斯-穆达诺C，金布尔KD。(2010)结缔组织疾病自身抗体的基因芯片ELISA检测。J clinical diagnosis Res 6: 145-149。［裁判。］
23. Okada H，Kuhn C，Feillet H，Bach JF（2010）自身免疫和过敏性疾病的“卫生假说”：更新。临床实验免疫160:1-9[裁判。］
24. (1)遗传力与环境对自身免疫的影响。J Autoimmun 39: 249-252。［裁判。］
25. Fujinami RS, von Herrath MG, Christen U, Whitton JL(2006)分子拟态、旁观者激活或病毒持久性:感染和自身免疫性疾病。临床微生物学报告19:80-94。［裁判。］
26. 陈志强(2002)吸烟与甲状腺疾病之meta分析。Eur J Endocrinol 146: 153-161。［裁判。］
27. Waisberg M, Tarasenko T, Vickers BK, Scott BL, Willcocks LC, et al.(2010)系统性红斑狼疮的遗传易感性保护小鼠免受脑型疟疾。PNAS 108: 1122 - 1127。［裁判。］
28. Zafrir Y, Gilburd B, Carrasco MG, Kivity S, Sánchez-Castañón M，等。免疫研究56:451-456。［裁判。］

在此处下载临时PDF

条信息

文章类型:研究文章

引用:Sourabié Y, Bazié WW, I Sangaré， Sirima C, Ouédraogo MS, et al.(2016)有限环境国家(布基纳法索)自身免疫性疾病:用于早期诊断的特定生物标志物的流行病学、技术和诊断性能。自体免疫感染疾病2(2):doi http://dx.doi.org/10.16966/2470-1025.112

版权:©2016 Sourabié Y，等。这是一篇开放获取的文章，在知识共享署名许可协议的条款下发布，该协议允许在任何媒体上无限制地使用、发布和复制，前提是注明原作者和来源。

出版的历史:

收到日期:2015年10月29日

接受日期:2016年3月26日

发表日期:2016年3月29日